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  • 项目名称: Sanger测序

概述

  对菌(菌液、穿刺菌、平板菌)、质粒、PCR产物(原液、已纯化)等不同类型的样品进行测序。提供质粒提取、PCR纯化、测序引物设计、DNA序列的基本数据分析,以及长片段walking测序后的序列拼接等生物信息学分析服务。

研究内容

 

  基本数据处理,包括Base calling及结果分类等。

技术流程

技术参数

一、样本要求

  (1) 菌液
    a. 500-1000 μL 新鲜菌液,也可提供 1-2 mL 菌液的沉淀菌体直接提取质粒;
    b. 注明载体抗性,我们提供Amp、Kana、Chl、Tet四种抗生素;特殊抗生素请自备,并标明使用浓度;
  (2) PCR 产物(已纯化)
    a. 浓度≥20ng/µl,体积≥20µl;
    b. 电泳检测条带单一;
    c. PCR产物溶于超纯水中;
  (3) PCR 原液(未纯化)
    a. 样品需求量:体积≥ 25 μL;
    b. 样品浓度:≥ 20 ng/μL;
  (4)质粒
    a. 样品需求量:体积≥ 20 μL;
    b. 样品浓度:≥100 ng/μL;
    c. 质粒溶于超纯水中。

  (5)自带引物浓度≥3.2pmol/μL ,每个反应提供量≥5μL ,请标明引物浓度。

二、项目执行周期

  (1)质粒、PCR已纯化及菌液直提样本24小时之内出结果;菌和PCR未纯化样品,24-48小时之内出结果;
  (2)如需要调整,根据不同的调整方法,实验周期相应延长1-3个工作日;
  (3)对于Walking样本,每一轮反应需2-3个工作日。

三、项目合格指标

  序列可信读长达到800bp(自然终止除外),第一轮反应三个工作日内出结果。