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  • 项目名称: Fosmid文库构建

概述

  Fosmid文库构建可用于全基因组的物理图谱构建、基因功能及表达调控的研究、重要性状基因的图位克隆和基因结构及功能的分析等。

  Fosmid文库构建应用了改进的Cosmid质粒载体,即将pBAC引入PUCcos融合后构建的载体系统。此载体具有如下特点:
  由于插入了大肠杆菌致育因子F-因子,所以在宿主菌中以单拷贝形式存在,稳定性好;
  载体具有可诱导的oriV高拷贝复制起始点,需要时可诱导达到高拷贝(50个左右);
  随机性好,保证了每段DNA在文库中出现的频率均等;
  插入片段的均一性好,一般在40Kb左右。

研究内容

  文库构建完成后进行分析鉴定,包括库容量、插入片段大小、随机性、Blast结果等。

技术参数

一、 样本要求

  (1)样品类型:DNA样品或新鲜的组织样品,植物组织最好为黄化苗,以降低叶绿体污染;

  (2)样品浓度及纯度:浓度≥ 50 ng/μL;DNA主带 ≥ 40 Kb;DNA总量 ≥ 50 μg(总量随库容量增加而增加);OD260/280= 1.8~2.0;DNA溶液肉眼观察无明显杂质。

二、 项目执行周期

  标准流程的执行周期为约30个工作日。

三、项目合格指标及提交结果

  (1)完成指标:插入片段大小约35-40Kb,空载率 ≤ 5%; 库容量=基因组大小×覆盖度/平均片段大小,保证初始库容为2万;

  (2)提交结果:96或384孔保菌板和文库送检报告。

技术路线