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  • 项目名称: sRNA测序

概述

  小RNA是一类重要的体内调节分子,主要包括miRNA、piRNA和siRNA。它的功能主要是诱导基因沉默,参与基因转录后调控,从而调节细胞生长、分化,以及个体发育、生殖等重要生物学过程。小RNA测序技术采用胶分离技术,收集样品中18-30nt的RNA片段,利用高通量测序技术,一次性获得单碱基分辨率的数百万条小RNA序列信息,依托强大的生物信息分析平台,鉴定已知小RNA,并预测新的小RNA及其靶标基因。 

技术优势

  1.通量高:一次测序得到500万条以上的序列;

  2.分辨率高:可以检测小?RNA单个碱基的差异;

  3.精准度高:从几个到数十万个拷贝精确计数;

  4.不依赖已知信息:既能鉴定已知小RNA,又能发现新小RNA;

  5.可重复性高:深度测序保证了抽样随机性,重复性非常好,无需重复实验。

研究内容

  基于Illumina HiSeqTM 2000高通量测序技术的小RNA数字化分析,采用边合成边测序的方法,可减少二级结构造成的区域缺失。该技术可以对高质量序列进行序列长度分布的统计及样品间公共序列统计,将筛选后的高质量序列分类注释,从而获得样品中包含的各组分及表达量信息,并对所有小RNA片段进行注释,对新的miRNA则进行靶基因预测。

一、标准信息分析

  1. 数据产出统计,对原始测序数据去接头污染,去低质量reads;

  2. 18~30 nt 小RNA 测序结果的长度分布;

  3. 样品间的公共序列和特异序列的分析;

  4. 小RNA在选定的参考基因组上的分布;

  5. 小RNA与rRNA、tRNA、snRNA、snoRNA的比对信息;

  6. 小RNA与重复序列的比对信息;

  7. 小RNA与外显子或内含子的比对信息;

  8. 小RNA与miRBase 中指定范围的已知的 miRNA的比对;

  9. 按照优先级将小RNA进行分类注释;

  10. 利用 Mireap 或mirdeep对没有注释的small RNA进行预测,预测新的miRNA,绘制新的miRNA 的二级结构图;

  11. 已知miRNA的表达谱构建;

  12. 已知miRNA 的家族分析。

二、高级信息分析(基于标准分析)

  1. 已知miRNA和novel miRNA的靶基因预测;

  2. 已知miRNA和Novel miRNA靶基因GO注释和KEGG;

  3. 已知miRNA的碱基编辑分析;

  4. 已知 miRNA 差异分析和聚类分析;

  5. Novel miRNA 差异分析(2个或2个以上样品)和聚类分析;

  6. 差异miRNA 靶基因预测;

  7. 差异miRNA 靶基因GO 注释和KEGG 通路分析。

三、可选项分析

  1. piRNA注释(选作,适用于人、鼠、斑马鱼、鸭嘴兽和果蝇);

  2. snoRNA注释(选作,只适用于人和植物);

  3. mir2disease数据库注释(选作,只适用于人)。

四、定制化信息分析

  可结合客户的材料与需求,协商确定定制化信息分析内容。

技术参数

一、 样本要求


样品类型:真核生物、原核生物;完整且无污染的总RNA;血清血浆及FFPE样品。
样品需求量(单次):≥1 μg;血清血浆:20ng;FFPE:200ng
样品浓度:15 ng/μL≤c≤500 ng/μL;
样品纯度:OD260/280 =1.8~2.2;OD260/230≥2.0;28S:18S≥1.5;RIN≥8.0;23S:16S≥1.5 (此项要求只针对原核生物)。


二、 项目执行周期


标准流程的运转周期为30个工作日。


三、项目合格指标


产生不低于合同规定的clean reads数。